舆论摘要：丹参APX和GPX基因克隆及其表白领会

平常情景下，植被体内活性氧的爆发和废除是一个动静的平稳进程，小批的活性氧可动作窘境下旗号分子介入植被的心理进程，洪量的活性氧会对植被形成卵白质、膜脂、DNA及其它细胞组分的重要氧化伤害。植被在成长发育进程中常常会遭到不良情况的威吓，如盐渍、干旱、低温等，个中盐威吓重要感化植被的成长。植被在情况威吓下身内会爆发洪量的活性氧，必需准时废除，为了缩小盐分等威吓形成的氧化伤害，植被在长久的进化进程中，产生了一套活性氧的废除养护体制，即植被体内灵验废除活性氧的酶促和非酶促体例。酶促体例重要囊括超氧化学物理歧化酶(SOD)、抗坏血酸过氧化酶(APX)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化酶(GPX)等；非酶类抗氧化剂囊括抗坏血酸(ASA)、还原形谷胱甘肽(GSH)等。对植被体内抗氧化养护酶基因的看法无助于于接洽植被在窘境下的心理情景并养护植被。本课题以丹参为接洽东西，克隆了丹参抗坏血酸过氧化酶基因(SmAPX)和丹参谷胱甘肽过氧化酶基因(SmGPX)。运用底栖生物消息学东西领会了两个基因的核苷酸及其推导的氨基酸酸序列特性，并对其酶分子三维立体构造等举行了猜测和领会。对它们在丹参体内各别部位的表白以及盐威吓前提下的表白情景举行了及时荧光定量PCR领会。建立了SmAPX和SmGPX的原核表白载体并对其在大肠杆菌M1第5中学的表白情景举行了领会。重要试验本领和论断如次：1. 按照丹参EST数据库中的已无序列，电子克隆获得SmAPX基因全长，并经过RT-PCR的本领赢得SmAPX的cDNA序列，该基因全长为758 bp，包括一个753 bp的盛开读码框，源代码250个氨基酸酸。应用底栖生物消息学东西对丹参APX基因的核苷酸序列及其源代码的氨基酸酸序列举行了领会，截止表白该基因的源代码产品是一不具跨膜构造域的亲水性卵白，定坐落细胞质中。及时荧光定量PCR领会表露SmAPX在丹参根、茎、叶中均有表白，但根中表白量最低，茎次之，叶中最高，叶片中的表白量为根中表白量的21倍。对SmAPX基因在盐威吓前提下的表白情景举行领会，截止表露，跟着盐威吓功夫的延迟及盐浓淡的升高，该基因的表白量均升高。浓淡为250 mM的盐溶液威吓72 h时，SmAPX的表白量为比较的2倍，浓淡为200 mM的盐溶液威吓48 h时，SmAPX表白量最高，比比较高7倍。SmAPX在大肠杆菌M1第5中学表白一分子量约为27kD的卵白，与猜测的卵白分子量普遍，其余，SmAPX基因的表白在确定水平上可普及大肠杆菌的耐盐性。2. 按照丹参EST数据库中的已无序列，电子克隆获得SmGPX基因全长，并经过RT-PCR的本领赢得SmGPX的cDNA序列，该基因全长535 bp，包括一个501 bp的盛开读码框，源代码166个氨基酸酸。应用底栖生物消息学东西对SmGPX的核苷酸序列及其源代码的氨基酸酸序列举行了领会，截止表白该基因的源代码产品在翻译后大概在12个位点爆发了盐酸化化装，是一不具跨膜构造域的可溶性细胞质型GPX。从其氨基酸酸序列所含的两个磷脂氢谷胱甘肽过氧化酶（PHGPX）的特性序列并贯串前述接洽，估计所克隆到的是GPX家属的一特出分子，即废除ROS养护底栖生物膜免受氧化伤害的PHGPX。从DNA程度也赢得该基因，Southern截止表白SmGPX以低正片情势生存于丹参基因组中。及时荧光定量PCR领会表露SmGPX在丹参根、茎、叶中均有表白，根中表白量最低，叶片次之，茎中表白量最高，茎中表白量为根中表白量的6.78倍；盐威吓处置的丹参植株体内SmGPX的表白量随威吓功夫的延迟在试验范畴内稳步升高，与比较比拟，浓淡为250 mM的盐溶液威吓72 h时SmGPX的表白量升高了2.69倍。SmGPX在大肠杆菌M1第5中学表白出一大概为其表面分子量二倍的卵白，估计大概是其二聚体情势。