舆论摘要：单细胞凝胶电泳──扫帚星试验本领的创造、变革与运用

　　单细胞凝胶电泳(single cell gel electrosis，SCGE)，又称扫帚星试验(comet assay)，是一种在单细胞程度举行DNA伤害的检验和测定本领，具备简单、精巧、赶快、样本用量小等便宜，普遍用来遗传毒性检验和测定、情况毒性检验和测定、分子时髦病学和DNA伤害与建设等接洽范围。 　　咱们在本试验室创造了单细胞凝胶电泳本领，并对局部操纵过程举行了变革，囊括(1)制胶本领变革；(2)减少干洗；(3)举行梯度乙醇脱水。在上述变革进程中，咱们用“灌胶”法在载玻片上制胶，代替了保守的运用磨砂载玻片上“三 明治”制胶，处置了扫帚星试验中罕见的脱胶局面，脱水后利于于赢得平坦胶面；在裂解后减少了干洗办法，以取消裂解液中的高盐和去垢剂对后续试验操纵的感化；沿用直流电稳压电源举行单细胞电泳，保护了试验截止的可反复性；对染色的前提举行了挑选，决定了运用EB动作细胞DNA的荧光染料；以CASP（免费）动作扫帚星图像的领会软硬件，创造了图像领会的本领。那些试验办法的变革以及试验过程的优化或规范化，简化了操纵步调，俭朴了功夫，并使截止领会越发简单。 　　为了考证上述变革后的试验体例能否真实，咱们用紫外光动作伤害因子处置细胞，开辟细胞DNA伤害，而后用扫帚星试验检验和测定这一伤害。从这一阴性模子的截止领会来看，创造细胞伤害表露出很好的功夫依附性，表白该试验体例的真实性。 咱们同声挑选并评介了扫帚星试验中相关的DNA伤害领会目标，创造Tail Length，Comet Length，Tail Moment和OliVe Tail M0ment动作DNA伤害的评介目标比拟真实。 　　咱们创造了肝细胞的构造块原代培植体例。在创造肝细胞构造块原代培植试验过程中，咱们对试验的各个办法，比方构造块贴壁须要的功夫、细胞成长所需的培植基品种、培植基增添剂以及众生构造供体年纪等举行了挑选，创造了小鼠 肝细胞构造块的原代培植体例。 　　咱们用单细胞凝胶电泳本领对磁场和防癌药物对人白血病细胞K562以及小鼠原代肝细胞的DNA伤害举行了检验和测定。截止创造，K562细胞在9mT稳恒磁场中处置12h即可惹起细胞的DNA伤害，这一伤害到处理功夫的延迟而减少，具备功夫依附效力；同样前提下对原代肝细胞的处置以及更长功夫的处置(36h、48h、72h)均未创造细胞的DNA伤害。在运用较低浓淡紫杉醇(5Ong/mL)处置K562细胞l2h后，即可引导细胞DNA伤害，并展现出功夫依附效力，而仅在高浓淡长功夫的紫杉醇(8OOng/mL，24h)处置下才会惹起肝细胞的DNA伤害。800μg/mL环磷酰胺处置K562细胞12h即可惹起细胞的DNA伤害，而在1200μg/mL时刚才惹起肝细胞的DNA伤害。