论文摘要：模仿微重力对K562细胞分裂和细胞外表卵白表白的感化

摘 要航天员在航天遨游前提下展示“航天遨游性血虚”（space flight anemia）的病理局面,而红细胞天生碰壁大概是“航天遨游性血虚”的要害因为。促红细胞天生素（Epo）经过Epo受体在红细胞天生进程中起主宰效率。本试验查看NASA慢反转器模仿微重力情况对Epo开辟人红白血病细胞系K562细胞向红系分裂的感化，更加是对K562细胞膜上少许卵白的输送、定位的感化和细胞骨子的感化，细胞骨子的变革与卵白质输送的联系。舆论分以次两个局部实质：第一局部，模仿微重力对K562细胞分裂的感化。K562细胞置入NASA慢反转器回旋细胞培植安装内培植，介入红细胞天生素（Epo）1U/ml，以20 rpm回旋48 h后取细胞举行试验，同声设地面临照。细胞计数领会细胞增殖情景；联苯胺染色法检验和测定细胞血红卵白合成情景；用FITC标志的抗原和流式细胞术检验和测定红细胞分裂标记卵白音型糖卵白A（GPA）和转铁卵白受体（CD71）在细胞外表的表白情景；用Oregon Green® 488贯串的鬼笔环肽和紫杉醇辨别表露纤维型肌动卵白F-actin和会合型微管卵白，流式细胞仪和荧光显微内窥镜检查测并查看细胞骨子的变革。K562细胞在回旋培植48h后细胞密度为（3.1±1.0）×105/ml，而大地培植细胞密度为（4.5±1.1）×105/ml，两组间分别有明显性；介入Epo可鲜明激动大地培植细胞增殖，密度为（5.6±0.9）×105 /ml，而慢反转培植对Epo的刺猛增殖效率有明显控制效率，此时细胞密度降为（3.4±1.4）×105/ml。Epo可激动大地培植K562细胞红系分裂，联苯胺阴性细胞从普通程度的5.9%减少到15%，而慢反转培植明显控制Epo开辟的分裂（降为9%）。慢反转培植还能明显控制GPA和CD71在细胞外表的表白。其余，慢反转培植激动微管解聚，但没有查看到F-actin的鲜明变革。GPA和71在细胞外表表白量低沉，有大概是模仿微重力情况使细胞骨子解聚，爆发凌乱，使依附于细胞骨子举行卵白输送的道路爆发妨碍所至。而慢反转模仿微重力情况对那些细胞外表卵白（个中还囊括EpoR）表白的感化是惹起Epo开辟K562细胞红系分裂的控制的因为之一。第二局部，创造胰卵白酶消化细胞外表卵白回复模子。为进一步接洽细胞骨子与卵白质输送的联系，创造了胰卵白酶消化细胞外表卵白音型糖卵白A和转铁卵白受体CD71回复模子。试验运用胰卵白酶来消化K562细胞外表的卵白的胞外局部，使之不被奇异抗原辨别，运用流式细胞仪检验和测定音型糖卵白A和CD71被消化后在细胞外表的FITC标志奇异抗原辨别率的回复功夫。截止创造，确定功夫内胰卵白酶消化对K562细胞活性感化不大，消化2h细胞活性也没有鲜明变革。胰卵白酶消化K562细胞，细胞外表GPA在细胞外表的奇异抗原辨别率赶快低沉，消化15min细胞外表GPA的奇异抗原辨别率降到1%以次，CD71在消化30min后降到3%以次。K562细胞在被胰卵白酶消化30min后连接培植，GPA的细胞外表奇异抗原辨别率回复较慢，72h才回复到平常程度；而CD71回复较快，在7h内回复到平常程度。那些接洽截止表白胰卵白酶消化细胞外表卵白回复模子为接洽细胞外表卵白能源学变革顺序和卵白细胞膜定位感化成分接洽供给了简单而灵验的模子，为进一步接洽微重力前提下细胞外表卵白表白与细胞骨子的联系奠定了普通。同声，那些试验截止也表露，商量到胰卵白酶消化对试验截止爆发的感化，在做细胞外表卵白表白试验时应慎用胰卵白酶。要害词：模仿微重力，音型糖卵白A，转铁卵白受体，细胞骨子，胰卵白酶，红系分裂