舆论摘要：鉴于rbcL、matK基因序列商量松科体例进化的大概性及rbcL、matK基因SSCP领会

太白红杉（Larix chinensis Beissn）属秦岭私有植被，是丛林下限树种，被名列国度二级养护植被。按照文件记录以及咱们的旷野观察：太白红杉的个别数量少，控制散布于秦岭的少量地域。普遍觉得，太白红杉是第四纪冰川的余存植被，历尽沧桑冰川的掩盖后，大地上开始回复的木本植被是松科植被，所以咱们有需要商量落叶松属的体例衍化及太白红杉在松科的体例场所。 rbcL基因和matK基因均为叶绿体基因。rbcL基因源代码核酮糖-1,5-二盐酸羧化/加氧酶（Rubisco，Rbc）的大亚基，matK基因坐落trnK基因的内含子中，源代码的老练酶介入RNA转录体中Ⅱ型内含子的剪切。暂时这两个基因已普遍用来植被体例发育领会。 鉴于之上商量，咱们开始扩大与增加了太白红杉、华北落叶松、大果红杉的rbcL基因和matK基因序列，贯串网上共享的松科其它植被的序列对太白红杉的体例场所作了探究。在截止领会中运用了Chromas、SeqVerter、DNASIS2.5、ClustalX2.0、Mega2.0和PAUP4.0*等整治和领会软硬件，获得如次截止： 1.rbcL和matK基因在碱基构成上各别，rbcL暗号子的pos#1GC含量较高，而matK暗号子的pos#3GC含量较高；rbcL3个位点遭到的渐变效率沟通，matK pos#1遭到的渐变效率较2、3位点大；rbcL的碱基替代大多爆发在pos#3，而matK的碱基替代平衡爆发在3个位点上。rbcL碱基替代TV呈饱和状况，而matK的TS，TV与p-distance都呈线性联系，matK的替代未饱和。 2.在用rbcL和matK序列建立的体例树上，冷杉属、油杉属和款项松属一直聚在一道；rbcL序列建立的体例树上，银杉属与松属联系较近，而在matK建立的体例树上，银杉属与云杉属聚在一道。 3.在rbcL+matK序列建立的体例树上，红杉组和落叶松组先分红两支，落叶松组的阿曼落叶松和美加落叶松亲缘联系较近。因为rbcL和matK这两个序列都坐落叶绿体上，进化道路有一致性，更限于功夫、经费、数据等因为，未得出太白红杉的真实体例场所，然而贯串核基因序列或线粒体基因序列，不妨获得理念的截止。 4.在树立领会中，用了隔绝法（连接法）和性状数据领会法（最大简单法）2种本领，获得的截止有一致之处，如冷杉属、油杉属和款项松属一直优先聚在一道。用最大简单法得出的体例树，纵然没有处置体例爆发题目，然而与隔绝法得出的截止比拟，树状图表露的联系更简单让人接收。 其次，商量了各别松科植被资料DNA的索取前提以及rbcL基因和matK基因的PCR-SSCP感化前提。所谓SSCP即单链构象多型性。双链 DNA高温解链后即赶快冷却，使单链 DNA在低温下因为碱基的局部互补爆发自己折叠，产生二级构造，常常DNA头等构造的一个碱基爆发变换就会引导构型的变异，这种变异经中性聚丙烯酰胺凝胶电泳经过带型分别展现出来。PCR-SSCP即是将PCR产品变性后作的中性聚丙烯酰胺凝胶电泳领会。截止表白： 1.同一植被各别部位索取的功效各别，各别的构造器官实用各别的索取本领：针叶、未木质化新梢及新发的新苗符合CTAB法，而健将须要沿用卵白酶K法。咱们试验用-20℃冷藏1个月的针叶和新梢作资料索取总DNA，也赢得了较好的截止，证明惯例冷冻不妨短期生存资料。 2.在CTAB法索取DNA样本进程中，没有运用RNA酶，粗提样本也没有进前进一步的纯化处置，对粗提的DNA样本举行rbcL和matK基因扩大与增加，截止表白DNA样本中生存RNA对扩大与增加截止没有感化。 3.PCR-SSCP领会时，凝胶的交联度对带型的明显水平有很大的感化，领会时，开始应付凝胶的交联度举行预试验。 4.各别的凝胶浓淡对带型感化很大，沟通巨细DNA分子在5％的凝胶上有明显的带型，而在3.5％的凝胶上带型不宁静。 5.电泳情况温度对电泳带型有感化，4℃电泳8h 与20℃电泳5h隔绝基础沟通，然而后者带型不佳，而前者带型明显。 6.咱们辨别用1×TBE和 0.5×TBE对3.5%和5%的凝胶举行电泳，创造两种离子浓淡下，5%的胶获得明显的带型，证明离子浓淡对电泳截止没有感化。 第三，普遍鸿儒觉得，在索取植被总DNA时，多糖是感化索取功效的一个很要害成分。然而在咱们的考查中，对太白红杉的健将和新苗辨别举行了多糖含量的测定，截止表露：可溶性多糖并不是感化总DNA索取功效的确定成分。