舆论摘要：hL52基因的功效接洽

　　在探求新式造血调节和控制基因时，自小鼠骨髓造血基质细胞中经过控制性 差减杂交(SSH)本领挑选赢得的一条新基因，即mL52号基因，因为mL52基因 与人的基因具备100％的同源性，所以人的该同源基因定名为hL52基因。 　　本接洽是往日期的基因序列及卵白质构造等接洽为普通,重要手段是揭穿该 基因的功效，接洽hL52基因表白产品的底栖生物学效率。按照DNAStar软硬件对其卵白 质序列举行的构造领会估计其大概为一种抗菌肽。但hL52能否是抗菌肽基因，还 未获得表明，本试验经过hL52奇异卵白表白、抑菌试验、转基因等本领对其功效 举行接洽。 　　1.经过SDS-PAGE试图赢得hL52的奇异性表白卵白。将hL52基因贯穿在 pET22b(+)的载体上，并将贯穿好的载体变化到大肠杆菌BL2第11中学，同声用空 载体pET22b(+)做阴性比较。将pET22b(+)-hL52(no tag)变化后的BL21 涂于含有氨苄的琼脂板，举行挑选，挑长出的克隆举行培植，提质粒并举行酶切 审定，选一个阴性克隆和一个阴性克隆，再选一个转入机载的克隆，每个克隆再 分红两局部，一局部在摇菌进程中介入IPTG开辟，一局部不加IPTG，一段功夫 后将菌液离心，弃上清收积淀，加细胞裂解液将菌裂解，将裂解液做SDS-PAGE， 截止没有创造开辟后的BL21有奇异条带的爆发。证明hL52基因的表白产品在产 生后大概登时表现其底栖生物学效率进而被赶快降解，故没辙在PAGE胶上看到奇异 的卵白表白条带。 　　2.考证HL52卵白能否具备抑菌效率。将pET22b(+)-hL52(no tag)转 化后的BL21阴性克隆举行液体培植，在培植进程中加IPTG开辟该基因的表白， 试验经过多组比较以大肠杆菌的成长能否遭到控制，表明hL52基因的表白产品的 抗菌活性。试验截止表露，pET22b(+)-hL52(no tag)变化后的BL21经IPTG 开辟后，大肠杆菌BL21的成长鲜明地遭到控制，表明hL52基因的表白产品确具 有抗菌活性。 　　3.hL52基因的表白产品对真核细胞的效率。在胞外即细胞培植液中介入含有 HL52卵白的酵母上清。采用毕赤酵母(Pichia)建立了酵母底栖生物反馈器，将pPIC 9K-hL52转入毕赤酵母中，向培植液中介入丙醇，可开辟爆发外源基因hL52的 表白卵白，离心取培植液上清，将该上清加到成长状况杰出的真核细胞HepG2的 培植液中，并以HepG2细胞培植液中不加酵母上清，和HepG2细胞培植液中加不 表白外源基因hL52的酵母上清动作两组比较。截止加用甲醛开辟后的上清的细胞 存活功夫最长。 　　4.向细胞内knock-in该基因的试验。建立载体pCDNA31-hL52(no tag)，转染进 HepG2细胞中，建立宁静表白株，同步做一组阴性比较，即转入机载的宁静表白 株。待宁静表白株建好后，接收两组细胞测FACS，截止表露细胞的中断在G0／G1 期的细胞较多。 　　归纳之上试验截止咱们不妨得出以次论断：hL52基因的表白产品真实为抗菌 肽，且具备鲜明的抑菌功效；对真核细胞还具备延迟细胞周期的效率，简直展现 为使细胞中断在G0／G1期的功夫延迟，细胞的增殖就会相映减慢，进而对培植液 中养分因素的耗费也变慢，以是介入用甲醛开辟后的酵母上清的细胞存活功夫最 长。 　　但相关hL52基因的表白产品是经过何种效率体制使得真核细胞的细胞周期延 长，这个将有待于于进一步的接洽。