舆论摘要：HMGR基因表白载体建立及其对丹参遗传变化的接洽

　　丹参(Salviamailtiorrhiza Bunge．)是我国保守国药，具备祛瘀止痛、 活血通经、清心除烦和滋养等效率，在临床上用来心血管病症、暗疾、抗单薄等 上面的调节，功效明显。其脂溶性因素一丹参酮，展现出抗菌、抑菌、抗炎等多 种底栖生物活性，是丹参的重要灵验成份之一。 　　丹参酮类复合物多属于二萜类复合物，普遍觉得其合成道路应属于盐酸安非拉酮酸／ 盐酸硝化甘油醛新陈代谢道路。但有证明表白，丹参酮类复合物的底栖生物合成道路也遭到甲 羟戊酸道路的感化。在甲羟戊酸道路中，3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A恢复酶 (3－hy droxy－3－methylglutaryl coenzyme A reductase HMGR)基因是甲羟戊酸途 径中的第一个要害酶，其卑劣产品的积聚受HMGR活性的遏制。本试验运用农杆菌 介导法将根源于构巢曲霉(Aspergillus nidulans．)的3－羟基－3－甲基戊二酰辅 酶A恢复酶(HMGR)基因导出丹参，赢得转基因植株。在创造丹参变化体制的同声， 为进一步运用基因工程本领调节和控制丹参次生新陈代谢产品含量等接洽奠定普通。本试验 重要接洽截止如次： 　　(1)将根源于构巢曲霉的HMGR基因偕同ubiquitin启用子以及nos中断子插 入pCAMBIA2301的多克隆位点，建立植被表白载体pCAMH。经过对表白载体酶切 考证和对手段基因举行PCR扩大与增加检验和测定，证明HMGR基因已插入：pCAMBIA2301多克隆 位点，而后将其导出农杆菌EHA105。 　　以丹参无菌苗的叶片为外植体，以抗性芽的爆发和植株复活为目标，运用农杆 菌介导本领，将外源HMGR基因导出丹参中，赢得了一批变化丹参的抗性植株。 　　(2)在基因变化进程中，接洽了农杆菌介导丹参变化的感化因子，截止表白： 农杆菌感化功夫和菌液浓淡均对丹参的变化有鲜明的感化。感化功夫以20min 安排为宜：菌液浓淡以OD6oo0.2为宜。在外植体预培植、农杆菌感化以及共培植阶 段，增添乙酰紫丁香酮对丹参变化频次并无鲜明感化。 　　(3)经过对转基因丹参举行PCR检验和测定，奇异性扩大与增加Kana抗性植株总DNA中外 源HMGR基因片断以及对其举行Sout hern印迹杂交领会，证明HMGR基因已成功整 合到转基因丹参植株的基因组，变化功效为70％。索取Kana抗性转基因丹参植 株的总RNA并举行RT-PCR。转基因叶片总RNA经RT-PCR后，均看来HMGR基因 mRNA扩大与增加条带，表白HMGR基因在转基因丹参中mRNA程度上已有表白。 　　经过内项接洽，咱们将HMGR基因转入丹参基因组中，并由此创造了HMGR基 因变化丹参的高频复活体制。该项接洽截止为今保守一步接洽转基因丹参中外源 HMGR基因在植被体内的表白，甲羟戊酸道路对于丹参酮类复合物底栖生物合成的感化 以及精确丹参酮类复合物合成道路的接洽等奠定了普通。