舆论摘要：羔羊凝乳酶索取辨别及个性的接洽

本试验以关中奶山羊皱胃为材料，对羔羊喂奶情景、宰杀年纪、皱胃处置办法和各别索取本领对凝乳酶活性的感化，凝乳酶原的激活，凝乳酶纯化与辨别以及凝乳酶和胃卵白酶个性举行了体例的接洽，为羔羊凝乳酶开拓以及在干酪消费中的运用供给表面普通。 羔羊喂奶情景接洽表白，全喂奶组凝乳活性最高(26108SU/g)，卵白水解活性与随机喂奶组无鲜明分辨（P>0.05），而全喂草料组卵白水解活性最高(1925U/g)，这表白喂奶不妨刺激皱胃中凝乳酶的连接渗透。宰杀年纪试验表白，羔羊出身5天时，凝乳活性与卵白水解活性比例(C/P)最大，是索取羔羊凝乳酶的最好年纪。 皱胃处置办法接洽截止表白，冷冻处置对酶活性感化最小，盐渍风干处置感化较大，天然风干处置酶活性丢失最多。同声还创造盐渍风干处置和天然风干处置可使皱胃中一局部酶原机动激活。 用保守本领和各别pH缓冲液本领索取羔羊凝乳酶时，食盐浓淡、索取功夫、索取温度、索取液与皱胃比率、索取度数对凝乳活性有要害的感化。跟着食盐浓淡增大，凝乳活性渐渐普及，当到达确定浓淡后，凝乳活性又渐渐贬低；在索取前期，索取速率较快，凝乳活性鲜明普及，当索取到达最大值后，凝乳活性又渐渐低沉；跟着索取温度的升高，凝乳活性渐渐增大，但温渡过高时，会引导酶变性失活；跟着索取液与皱胃比率的增大，酶溶出速率加速，索取度数越多，皱胃中酶索取越充溢，索取2次后，皱胃中绝大局部酶被提出。正交考查表白，用保守本领索取时，当食盐浓淡8%，皱胃与索取液比率1:20，索取温度30℃，索取功夫48h，索取最大凝乳活性为65700SU/g；用pH4.5缓冲液索取时，当食盐浓淡6%，皱胃与索取液比率1:10，索取温度30℃，索取功夫60h，索取最大凝乳活性为58200SU/g；用pH5.4缓冲液索取时，当食盐浓淡8%，皱胃与索取液比率为1:20，索取温度30℃，索取功夫48h，索取最大凝乳活性72300SU/g；用pH6.0缓冲索取时，当食盐浓淡8%，皱胃与索取比率1:10，索取温度25℃，索取功夫48h，索取最大凝乳活性为63850SU/g。由此看来，用pH5.4缓冲液索取，可赢得最大的酶活性产量。 本试验还对低声波在羔羊凝乳酶索取中的运用举行商量，截止表白，超声索取可大大减少索取功夫，超声索取40min可到达保守本领48h的索取功效。在食盐浓淡8%，皱胃与索取液比率1:15时，用30W/cm2超声强度索取40min，可赢得最大的凝乳活性。羔羊凝乳酶以无活性的酶原情势渗透，pH，食盐和温度对其激活有要害的感化。pH越低，激活速率越快，在pH2.0激活时仅需5—10min，pH3.0时须要30min，在较低pH下激活，已激活酶不宁静，易失活；跟着缓冲液中NaCl浓淡的减少，激活速率随之加速；在5℃下激活速率特殊慢慢，25℃之上激活速率鲜明加速。 干酪消费中运用的酶是凝乳酶和胃卵白酶的粗提物，运用凝胶过滤层析和离子调换层析对羔羊凝乳酶粗提物纯化辨别截止表白，凝胶过滤层析不许使两种酶辨别，仅取消一局部杂卵白；运用DEAE纤维素（DE—32）离子调换层析，可取消大局部杂卵白，使凝乳酶和胃卵白酶实足辨别。其余，在对样本浓缩时创造，羔羊凝乳酶粗提物中含有分子量小于10000的活性小肽物资，这在凝胶过滤层析时展示峰Ⅱ和峰Ⅲ亦获得证明。运用SDS—PAGE凝胶电泳和PAGE凝胶等电聚焦电泳对纯化羔羊凝乳酶和胃卵白酶测定截止表白，羔羊凝乳酶分子量为30700，等电点为pH4.5；羔羊胃卵白酶分子量为29900，等电点为pH4.4。 羔羊凝乳酶个性接洽表白，最适凝乳温度为45℃；45℃处置60min，酶活性发端贬低，60℃处置60min，酶活性实足流失；酶最适pH为2.0—4.0，在pH2.0—6.0范畴内维持24h，具备较好的宁静性；在凝乳进程中，跟着材料乳pH低沉，凝乳活性渐渐增大；跟着酶溶液中离子强度的减少，凝乳活性渐渐贬低；乳中Ca2+具备鲜明的促凝效率，当CaCl2浓淡大于0.03%时，凝乳活性趋向于宁静；Al3+可鲜明普及酶的凝乳活性，Cu2+和Zn2+对酶活性有控制效率；跟着乳液浓淡增大，凝乳活性渐渐减少，当浓淡大于15%时，凝乳活性趋于宁静；以酪卵白为底物，跟着功夫延迟，卵白水解活性渐渐增大，能源学个性接洽表白，米氏常数Km1为6.1 g/L。 羔羊胃卵白酶最适凝乳温度为45℃；在45℃处置30min，酶活性发端低沉，60℃处置30min，酶活性实足流失；酶的最适pH为1.0—3.0，在此pH范畴内具备很好的宁静性；材料乳pH、Ca2+浓淡、乳液浓淡和离子强度对凝乳活性的感化与凝乳酶顺序普遍；Al3+鲜明普及其凝乳活性，Fe2+具备确定的促凝效率；以酪卵白为底物，卵白水解活性鲜明高于凝乳酶，米氏常数Km2为234.5g/L。