论文摘要：流动注射偶合放大化学发光免疫分析检测方法的研究

　　近年来，许多非放射性同位素标记的免疫分析方法相继出现，其中化学发光免疫分析法以其测定灵敏度高，线形范围宽，仪器设备简单，试剂价格低廉，方法稳定，测定速度快等优点，以成为放射免疫分析最有力的竞争者。但是基于HRP直接催化Lumionl-H2O2化学发光体系测定HRP和HRP标记物的灵敏度还不够高，远不能满足酶免疫分析的要求，曾有报告利用偶合反应化学发光体系测定HRP及其标记物，灵敏度远高于直接化学发光体系，但由于静态法，不宜于实现操作的自动化。固相免疫分析以其干扰少，灵敏度高等优点在临床检验中被广泛采用，但是这类方法存在着操作过程复杂，分析速度慢以及难以实现自动化等缺点。从八十年代中期以来，国外陆续有人提出将流动注射技术与固相免疫技术相结合，以提高固相免疫分析速度和自动化程度，但由于最终检测多采用电化学法和光度法，灵敏度不够理想。为了提高灵敏度，便于实现操作自动化，本文首次提出了将HRP和HRP标记物固定在粗孔硅胶上做成固定化酶柱，利用流动注射偶合反映化学发光体系测定HRP和HRP标记物的方法。共研究了两个体系。本方法测定HRP及HRP标记物的灵敏度高，线形范围宽，采用流动注射式进样，操作方便，而且由于采用硅胶作为固定酶的载体较前用多孔玻璃作载体要经济得多，为免疫分析提供了一种灵敏度高且易于实现操作自动化的检测方法。 　　一、利用K_4Fe(CN)_6-H_2O_2-HRP-Luminol流动注射偶合反应化学发光体系建立了HRP及HRP标记物的测定方法。这种方法是先将K_4Fe(CN)_6和H_2O_2溶液通过HRP或其标记物的固定化柱子反应生成产物K_3Fe(CN)_6，此产物再同Luminol溶液发光，以化学发光强度来测定HRP及HRP标记物的量。该方法测定HRP的线性范围为0.04-300ug/tube， 检出限为7.4ng/tube。对0.75ug/tube的HRP连续7次测定的相对标准偏差为7.1％。用该方法对羊抗人IgG-HRP(已过有效使用期的)标记物进行测定，可测到1：770，将此酶活性与HRP作对照实验，得此稀释比的HRP标记物的酶相当于20ng/tube的HRP，即用此体系测定HRP标记物的灵敏度与测HRP的灵敏度相当。实验结果表明，此方法可用于HRP及其标记物的快速，灵敏的测定，可用作流动注射化学发光免疫分析的检测方法。 　　二、本文还利用研究K_4Fe(CN)_6-H_2O_2-HRP-Luminol体系的同样的方法研究了KI-H_2O_2-HRP-Luminol流动注射偶合反应化学发光体系测定HRP 及HRP 标记物的方法，但测定灵敏度不令人满意。本文从几个方面分析了利用此体系测定HRP 及HRP标记物灵敏度低的原因。